ESTANDARIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN DE ADN PARA PCR-RAPD EN Aloe vera (L.) Burm.f. (ALOACEAE)

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ESTANDARIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN DE ADN PARA PCR-RAPD EN Aloe vera (L.) Burm.f. (ALOACEAE)

Standardization of DNA isolation process for PCR-RAPD
in Aloe vera (L.) Burm.f. (Aloaceae)

Imery, J., Raymúndez, M. y Menéndez-Yuffa, A.

Instituto de Biología Experimental. Postgrado en Botánica. Facultad de Ciencias. Universidad Central de Venezuela.

R E S U M E N
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Aloe vera es una especie suculenta rica en polisacáridos con propiedades emolientes, cicatrizantes y regenerantes, industrializados para la elaboración de diversos productos medicinales y cosméticos. La necesidad de realizar estudios de biología molecular en esta especie y sus derivados experimentales en programas de mejora genética motivó el inicio de ensayos de selección y tratamiento del tejido, métodos de deshidratación y conservación de las muestras de campo, protocolos de extracción y amplificación de ADN. En el presente trabajo se evaluó la pureza, concentración e integridad del ADN proveniente de la base (B) y ápice (A) foliar, empleando mesófilo fresco, deshidratado en estufa (45 ºC/18 h), en sílica gel (DSG) hasta el momento de la extracción y otro conservado en polvo a -20 ºC (DSGC). Se aplicó el protocolo CTAB con modificaciones: incubación a 65 ºC/2 h en 700 ml búfer 3X (3 % CTAB, 1,4 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM Tris-HCl pH 8, 0,7 % 2-mercaptoetanol); extracción con 1V de 24:1 cloroformo:alcohol isoamílico (CIA) por inversión suave (IS)/10 min; limpieza con 50 ml búfer 10X (10 % CTAB, 0,7 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM Tris-HCl pH 8, 1 % PVP)/5 min, 1 V de CIA e IS/10 min; precipitación de ADN mediante IS en 2/3 V de isopropanol frío y refrigeración a -20 ºC/20 min; lavado con 1/2 V de 76 % etanol y 10 mM AcNH4; y resuspensión en 150 ml TE. Todas las centrifugaciones a 13.000 rpm/10 min. Los extractos de mayor calidad se lograron con 10-20 mg de tejido joven (B) en plantas sometidas a oscuridad/48 h. Los tratamientos DSG y DSGC resultaron convenientes para facilitar la conservación y traslado de muestras, eliminar el exceso de humedad del parénquima y aumentar la relación núcleo/citoplasma, sin comprometer la integridad del ADN. Las diluciones a 50 ng/ml de ADN produjeron fragmentos PCR-RAPDs entre 500-2.050 pb claramente visibles en electroforesis de agarosa, permitiendo establecer los perfiles de bandas para cada uno de los 22 primers utilizados.

Palabras clave: Aloe, ADN, PCR-RAPD.
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